關(guān)鍵詞： 小鼠明暗穿箱實驗

目的：本操作規(guī)程是關(guān)于利用小鼠明暗穿箱實驗對受試物的抗焦慮活性進行藥理學(xué)評價的具體操作規(guī)程。

背景知識：無

原理：動物置于明箱中央，背朝隔板。暗箱紅燈不通電，明箱白熾燈照明。造成動物焦慮。

主體內(nèi)容（操作步驟）：

實驗的準(zhǔn)備

實驗的器材、儀器、藥品

儀器：分析天平，攝像儀，錄像機，監(jiān)視器，小鼠明暗箱（為一個上面敞開的箱子(45cm×27cm×27cm,上海欣軟信息科技有限公司提供),內(nèi)部分為明箱和暗箱，明箱占箱子的3/5，暗箱占2/5，有一個高出箱壁20cm的隔板分開，隔板的底部開一個7.5cm×7.5cm的方口。明箱內(nèi)涂成白色，由一個60W的白紙燈泡照明，燈泡高出箱子17cm.暗箱內(nèi)涂成黑色，上方17cm置一個不通電的紅色燈泡。箱子底部劃上邊長9cm的方格。）。

器材：紅燈（25W），白熾燈（60W）秒表。 

藥品：受試藥、陽性對照藥。

實驗動物

使用昆明種小鼠，雄性，體重范圍在18~22g之間。飼養(yǎng)于12h一個循環(huán)的反向明暗轉(zhuǎn)換的環(huán)境中（7am關(guān)燈）10d。實驗開始前5-7d每天撫摸動物1-2min，減少無關(guān)刺激對實驗的影響。對一般體征進行觀察，選用健康狀況良好的動物供實驗使用。

溶媒的配制

根據(jù)受試物的性質(zhì)選擇適當(dāng)溶媒，配制后在容器標(biāo)簽上記錄名稱、使用期限、配制日期、配制人。

受試物及陽性對照物的配制

實驗當(dāng)日給藥前將受試物及陽性對照物用溶媒充分溶解或混懸，根據(jù)給藥劑量及給藥容積配制成所需濃度的均勻的溶液或混懸液。

陰性對照物

原則上以配制受試物及陽性對照物時使用的溶媒作為陰性對照物。

實驗操作規(guī)程（附加資料I）

1 分組 將小鼠稱重后記錄體重，按體重隨機分組，每組10只。

2 給藥 經(jīng)口給藥,給藥容積為0.1-0.2ml/10g，各組實驗動物的測試呈正反交替順序進行，記錄給藥時間。

3 致焦慮 給藥適當(dāng)時間后，將小鼠置于明箱中央，背朝隔板。實驗于10am至2pm安靜環(huán)境下進行，暗箱紅燈不通電，明箱白熾燈照明。每只小鼠測試后迷路用濕海綿徹底清洗并擦干。

4 記錄實驗過程 通過明暗箱上方的攝像機及與隔壁房間相連的監(jiān)視器和錄像機觀察和記錄5min內(nèi)小鼠的活動情況。

5 數(shù)據(jù)讀取 由不知情的熟練實驗人員觀看實驗錄像帶，分別記錄小鼠穿箱次數(shù)、在明箱停留的時間及總穿格次數(shù)。

結(jié)果判定

1 穿箱次數(shù)

穿箱次數(shù)以平均值?標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 明箱停留時間

明箱停留時間以平均值?標(biāo)準(zhǔn)差表示。

3 總穿格次數(shù)

總穿格次數(shù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

在對照組和給藥組之間以穿箱次數(shù)、明箱停留的時間及總穿格次數(shù)分別進行Student’s t檢驗，判斷給藥后有無顯著性差異。

參考文獻（附加資料II）Nicholas M. Barnes, Celine H.K.Cheng, et al: Prpfiles of interaction of R(+)/S(-)-zacopride and anxiolytic agents in a mouse model. European Journal of Pharcology,218(1992):91-100

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